載體指南
相關(guān)服務(wù)
載體構(gòu)建質(zhì)粒DNA制備
病毒包裝服務(wù)
mRNA基因遞送解決方案
CRISPR基因編輯解決方案
shRNA基因敲低解決方案
植物基因表達(dá)質(zhì)粒載體
將常規(guī)質(zhì)粒載體導(dǎo)入植物細(xì)胞原生質(zhì)體是一種廣泛的使用方法,可通過化學(xué)轉(zhuǎn)化或電轉(zhuǎn)完成。雖然已經(jīng)開發(fā)了其他基因表達(dá)載體系統(tǒng)(如雙元載體),但常規(guī)質(zhì)粒基因表達(dá)載體仍被大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用,這主要得益于其在技術(shù)上的簡(jiǎn)便性以及在植物細(xì)胞中的高效轉(zhuǎn)染率。常規(guī)質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染的關(guān)鍵特點(diǎn)是短暫性,并且在宿主基因組中的整合效率非常低(通常小于1%)。
關(guān)于該載體系統(tǒng)的更多信息,請(qǐng)參考以下文獻(xiàn)。
參考文獻(xiàn) | 主題 |
---|---|
Biolistic and other non-Agrobacterium technologies of plant transformation, In Plant Biotechnology and Agriculture. Academic Press, San Diego, 2012, Pages 117-129 | Overview of plant transgenic methods using regular plasmid vectors. |
GM Crops. 1:276 (2010) | Overview of plant transgenic methods. |
亮點(diǎn)
我們的載體系統(tǒng)已經(jīng)過優(yōu)化,其在大腸桿菌中具有高拷貝復(fù)制能力,可對(duì)植物細(xì)胞進(jìn)行高效轉(zhuǎn)染,實(shí)現(xiàn)外源基因的高水平表達(dá)。
優(yōu)勢(shì)
技術(shù)簡(jiǎn)單:可通過化學(xué)轉(zhuǎn)染或電轉(zhuǎn)直接將質(zhì)粒載體導(dǎo)入到植物細(xì)胞中,而不需要額外的細(xì)菌菌株和克隆步驟。
載體容量非常大:我們的載體總?cè)萘靠蛇_(dá)30 kb,其中質(zhì)粒骨架只占3 kb,有足夠大的容量可以放置客戶所感興趣的序列。
高水平表達(dá):常規(guī)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,可以產(chǎn)生非常高的拷貝數(shù)(每個(gè)細(xì)胞多達(dá)幾千拷貝),使外源基因能高水平表達(dá)。
不足之處
載體DNA非整合型:常規(guī)質(zhì)粒在細(xì)胞里主要以游離DNA狀態(tài)存在,所以常規(guī)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染也稱為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。然而,質(zhì)粒DNA也可以以非常低的概率永久整合到宿主基因組中(質(zhì)粒轉(zhuǎn)染每102~106個(gè)細(xì)胞可能會(huì)有一個(gè)細(xì)胞的基因組被整合,整合效率取決于細(xì)胞類型)。如果將攜帶了藥物抗性基因或者熒光標(biāo)記基因的載體轉(zhuǎn)到細(xì)胞中,在經(jīng)過擴(kuò)大和傳代培養(yǎng)后,可以使用藥物篩選或細(xì)胞分選來獲得穩(wěn)定整合了該載體的細(xì)胞。
可轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型受限:不同類型植物細(xì)胞的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率差異較大。
基因拷貝數(shù)在不同細(xì)胞中呈現(xiàn)差異性:盡管成功的轉(zhuǎn)染可以在單個(gè)細(xì)胞里產(chǎn)生非常高的拷貝數(shù),但不同細(xì)胞間卻有高度的差異性。在一些細(xì)胞中,質(zhì)??截悢?shù)非常高,而在另外一些細(xì)胞卻是低拷貝甚至沒有。
載體關(guān)鍵元件
Promoter: The promoter driving your gene of interest is placed here.
Kozak: Kozak consensus sequence. This is placed in front of the start codon of the ORF of interest to facilitate translation initiation in eukaryotes.
ORF: The open reading frame of your gene of interest is placed here.
Nos pA: The nopaline synthase polyadenylation signal of Agrobacterium tumefaciens. This facilitates transcription termination of the upstream ORF.
Ampicillin: Ampicillin resistance gene. It allows the plasmid to be maintained by ampicillin selection in bacterial hosts.
pUC ori: pUC origin of replication. Plasmids carrying this origin exist in high copy numbers in E. coli.